PCR 실험세트 - 생물나라™
Ⅰ. 제품소개
이 제품은 Lambda Phage의 genome을 사용하여 PCR의 기초를 탐구할 수 있게 설계된 PCR kit입니다. 학생들은 세 개의 다른 프라이머 세트를 사용하여 Lambda Phage genome의 세 부분을 증폭시키고, 그 크기를 예측할 수 있습니다.
실험은 약 2시간 소요되며, PCR의 기본 이론과 실험 기구 사용법을 충분히 숙지 한 뒤 사용하는 것을 권장합니다.
● 본 제품으로 약 10회의 테스트가 가능합니다.
● 학급 혹은 그룹을 나누어 실험을 진행하실 때는 시약의 오염을 방지하기 위하여 소분하여 사용하는 것을 권장합니다.
Ⅱ. 제품구성
① 세트에 제공되는 구성품
DNA Polymerase 2X Master Mix | 450 μL |
Primer Set 1, Primer Set 2, Primer Set 3 | 각 50 μL |
Lambda Genomic DNA | 140 μL |
UltraPure dH2O | 500 μL |
DNA Ladder (100bp) | 55 μL |
0.2mL PCR Tubes | 50 tubes |
Dyne LoadingSTAR DNA Stain | 500 μL |
10X TBE Buffer | 125mL |
Premade Gel TBE, 1.5% | 5ea |
② 실험에 필요한 기기 (※키트에는 포함되어 있지 않습니다.)
Mini PCR machine | |
LED Transilluminator | |
전기영동장치 | |
마이크로피펫(2-20μL) | |
Ⅲ. 실험방법
샘플준비
- 실험 1회 진행 시 필요한 시약의 양은 아래 표를 참고바랍니다.
DNA Polymerase 2X Master Mix | 40 μL |
Primer Set 1, Primer Set 2, Primer Set 3 | 각 4 μL |
Lambda Genomic DNA | 12 μL |
dH2O | 16 μL |
DNA Ladder (100bp) | 4 μL |
0.2mL PCR Tubes | 4 tubes |
2. 4개의 PCR tube에 시약을 분주합니다.
| Tube 1 | Tube 2 | Tube 3 | Tube 4(NC)* |
2X Master Mix | 10 μL | 10 μL | 10 μL | 10 μL |
Primer | Primer1: 4 μL | Primer2: 4 μL | Primer3: 4 μL | - |
Lambda DNA | 3 μL | 3 μL | 3 μL | 3 μL |
dH2O | 3 μL | 3 μL | 3 μL | 3 μL |
Total | 20 μL | 20 μL | 20 μL | 20 μL |
* 음성대조군(Negative Control)의 경우 조성을 달리하여 실험할 수 있습니다. 예) 2X Master Mix 10μL, Primer 4μL, dH2O 6μL
3. 표와 같이 PCR을 설정하여 작동시킵니다.
단계 | 온도 | 시간 | 사이클 |
초기 변성 | 95℃ | 5:00 | 1 |
변성 | 95℃ | 0:30 | 30 |
결합 | 58℃ | 0:30 | |
신장 | 72℃ | 1:00 | |
최종 신장 | 72℃ | 5:00 | 1 |
| 4℃ | ∞ | |
4. 전기영동
∙ PCR 이 완료되면 PCR 산물 10ul 당 2 ul 의 비율로 Dyne LoadingSTAR 를 투입 후, 아가로오스 겔에 전기영동합니다.
∙ UV 로 겔을 확인하기 위해서는 LED Transilluminator를 사용하세요.
<예시>
① 1.5 아가로오스 젤을 준비한다.
② 0.5X TBE 버퍼가 담긴 탱크에 젤을 담근 후, PCR 산물을 로딩한다.
③ 100V 에서 25~30분 동안 전기영동을 진행한다.
Ⅳ. 실험결과 판독
- 전기영동한 젤에 UV 빛을 비추어 증폭된 PCR 산물을 확인합니다.
∙ 결과 예시
| 사용 프라이머 | 사이즈(bp) |
Lane 1 | Primer set 1 | 202 |
Lane 2 | Primer set 2 | 304 |
Lane 3 | Primer set 3 | 504 |
Lane 4 | 음성대조군 | - |
Ⅴ. 사용시 주의사항
본 키트를 사용하실 때 주의할 사항입니다. 잘 숙지하시고 올바르게 사용하여 주십시오.
본 키트를 실험 이외의 다른 용도로 사용할 수 없습니다.
Ⅵ. 보관방법
DNA Polymerase 2X Master Mix, Primer Set1, Primer Set2, Primer Set3, Lambda DNA, DNA Ladder,(냉동보관)
Dyne LoadingSTAR™ DNA stain, Premaed gel TBE, 1.5% (냉장보관)
유효 기한 : 제조일로부터 6개월
Ⅶ. 문제해결
상태 | 확인 및 조치사항 |
음성대조군 밴드가 뜸 | PCR 시약이 오염되었을 경우, 음성대조군에 증폭 밴드가 뜰 수 있습니다. 오염을 일으킬 수 있는 사항을 확인하고, 주의해서 실험합니다. 70% 알코올로 실험 테이블, 파이펫 등 실험 기구 소독 실험복, 실험 장갑 착용, 필요한 양 만큼 시약을 덜어서 사용 |